Taller de "Ciencia para Jóvenes", CIMAT, 22-29
de julio del 2001
Visita al CINVESTAV, Irapuato
27 de Julio 2001
Por Yuri Peña
Introducción
Uno de los problemas más comunes que se encuentran los
agricultores a nivel mundial es la infección de las plantas
por distintos patógenos (organizmos daninos): bacterias, hongos o virus; de estos,
los virus son los
más difíciles de tratar, debido a
que no existen agentes antivirales que permitan que sembradíos
enteros sean recuperados una vez que han sido infectados. Un virus que ataca a un vegetal, al
igual que un virus que ataca a un humano, posee
información genética en la que está codificada la
información necesaria para construir copias de si mismo usando
la maquinaria celular del hospedero para fabricar y ensamblar nuevos
virus. El ciclo de vida de un virus vegetal
involucra la inserción de la partícula infecciosa en las
células de la planta hospedero, junto con la información genética del
virus; esta información es susceptible de ser detectada por
distintas herramientas de la biotecnología. Durante la visita
en el centro vas a realizar una práctica usando una de estas técnicas: el PCR.
Para mas información, hay que leer la sección
"Introducción a la Biología
Molecular (Marco teórico...)", sobre todo la
parte de PCR.
Horario de la Visita (tentativo)
- 09:30 Llegada al CINVESTAV
- 09:40 Plática de bienvenida
- 10:00 Distribución en 12 grupos en los laboratorios
- 12:00 Recorrido en las instalaciones del Centro
(cada grupo con su encargado de laboratorio)
- 13:00 Comida en los jardines del centro (Tacos de
canasta y fruta!!!)
- 14:00 Regreso a los laboratorios
- 15:00
Reunión en los jardines del Centro para una
sesión de información y discusión acerca del
uso de organismos transgénicos (genéticamente
modificados) y bioseguridad.
- 16:30 Regreso a los laboratorio
- 17:00 Reunión en los jardines para preparar las exposiciónes.
- 17:30 Exposiciones
- 19:00 Salida del Centro
Descripción de la Práctica.
Antecedentes(*)
Algunos agricultores del Estado de Guanajuato han decidido comprar
varias toneladas de semillas de sorgo a un vendedor que les garantiza
que esa semilla se encuentra libre de virus. ¿Cómo puede
asegurarlo? Pues bien, tu tienes la misión de ayudar a estos
agricultores a decidir si esta semilla esta libre de virus o no...
Se te
proporcionarán muestras de ADN total de varios lotes de
semillas y mediante la técnica de PCR podrás determinar
si es cierto que estas plantas vienen libres de virus.
(*) Algunos hechos
(todos) de esta práctica son ficticios y fueron
diseñados solo con fines didácticos.
Tus Objetivos
- Realizar, mediante la técnica de PCR, una
amplificación del ADN de sorgo en las muestras.
- Detectar, mediante una electroforesis, la presencia de ADN viral
en las muestras.
Equipo de laboratorio
- Termociclador
- Micropipetas 20 y 200 μl
- Puntas (1-200 μl)
- Transiluminador UV
- Cámara de electroforesis y fuente de poder
- Minigel
Reactivos
- 3 tubos con distintas muestras de ADN total de
semillas de sorgo
- ADN viral
- Agua
- Marcador "estándar" de ADN 1000 pb
- PCR Supermix: deoxinucleótidos, MgCl2, Taq ADN Polimerasa, Buffer KCl, Agua
- Primers u oligos (Mezcla de oligos forward y
reverse)
Procedimiento de la práctica
10:00 - 12:00
- Aprende a usar las micropipetas
- Prepara
la reacción de PCR:
-
Prepara cinco tubos
eppendorf para PCR. En cada uno añade:
- 22.5 μl de PCR Supermix
- 1 μl de oligos (mezcla de forward y reverse)
- Márca los cinco tubos y añade:
- Al tubo 1: 1 μl de muestra 1
- Al tubo 2: 1 μl de muestra 2
- Al tubo 3: 1 μl de muestra 3
- Al tubo 4: 1 μl de ADN viral
- Al tubo 5: 1 μl de agua
- Corre las reacciones en un termociclador con el
siguiente programa:
- 95°C 7:00 minutos
- 30 ciclos de
- 95°C 1:00 minuto
- 55°C 1:00 minuto
- 72°C 1 minuto
- 72°C 5 minutos
- Prepara un gel de agarosa
al 0.8%
14:00 - 15:00
- Retira las reacciones de PCR del termociclador
- Prepara las muestras para cargarlas al gel
añadiendo a cada tubo 7 μl de buffer de carga
- Carga en el gel 10 μl de cada reacción de
amplificación y carga un ADN patrón (10 μl de Lambda EcoRI
HindIII incluido el buffer de carga)
- Corre la electroforesis a 80 voltios (aprox)
- Encárgale a tu instructor que vigile la
electroforesis para que no corra demasiado y pídele que le apague
oportunamente.
17:30 - 18:00
- Retira la electroforesis
- Observa el gel en luz ultravioleta
- Toma una foto del gel
- Analiza los resultados junto con tu instructor
Laboratorios a cargo de la práctica: Octavio Guerrero
Ana Elena Dorantes, Jorge Ramirez, Aileen O´connor, Harumi Shimada,
Juan Ramírez Pimentel y Tztzqui Chavez, Rodolfo Marsch y Dalia
Rodriguez, Andres Cruz, Jaime Bravo y Mario Serrano, Gustavo Treviño,
Alicia Chagoya, Ada Leon, Karina Lopez.
Coordinación de la visita: Yuri
Peña.